PCR反应计算器(仅供参考)
Fermentas Taq与KCl和MgCl2
| 组成 |
体积 |
反应 |
最终 |
| 10X缓冲区(包含 KCl和MgCl2已经) |
5.00 |
|
50.00 |
|
mM dNTPs |
1.00 |
|
10.00 |
| 正向引物 (
µM) |
1.00 |
|
10.00 |
| 反向引物 (
µM) |
1.00 |
|
10.00 |
| 模板 |
|
|
10.00 |
| Taq聚合酶 |
0.25 |
|
2.50 |
| ddH2O |
40.75 |
|
407.50 |
| |
|
|
500.00 |
推荐循环参数:
初始变性为 1-3分. 在 95°C
变性 94-95°C 为 0.5 - 2 分
退火温度 55°C 为 0.5 - 2 分
扩展 72°C 为 1 分每kb.
Bioline Taq
| 组成 |
体积 |
反应 |
最终 |
| 10X缓冲区(包含Mg++已经) |
5.00 |
|
50.00 |
|
mM dNTPs |
0.50 |
|
5.00 |
| 正向引物(
µM) |
1.00 |
|
10.00 |
| 反向引物 (
µM) |
1.00 |
|
10.00 |
| 模板 |
|
|
10.00 |
| Taq聚合酶 |
0.20 |
|
2.00 |
| ddH2O |
40.80 |
|
408.00 |
| |
|
|
500.00 |
推荐循环参数:推荐骑行参数
变性 94°C 为 15 - 30 秒
退火温度55°C 为15 - 30 秒
扩展 68°C 为 1 分每kb.
Invitrogen HiFi Platinum Taq
| 组成 |
体积 |
反应 |
最终 |
| 10X 缓冲区 |
5.00 |
|
50.00 |
|
mM dNTPs |
1.00 |
|
10.00 |
| 50 mM MgSO4 |
2.00 |
|
20.00 |
| 正向引物 (
µM) |
1.00 |
|
10.00 |
| 反向引物 (
µM) |
1.00 |
|
10.00 |
| 模板 |
|
|
10.00 |
| Taq聚合酶 |
0.20 |
|
2.00 |
| ddH2O |
39.80 |
|
398.00 |
| |
|
|
500.00 |
推荐循环参数:
变性94°C 为 15 - 30 秒
退火温度55°C 为 15 - 30 秒
扩展68°C 为 1分每 kb.
Novagen/Toyobo KOD聚合酶
|
组成 |
体积 |
反应 |
最终 |
| 10X 缓冲区 |
5.00 |
|
50.00 |
|
mM dNTPs |
5.00 |
|
50.00 |
| 25mM MgSO4(
mM 最终) |
3.00 |
|
30.00 |
| 正向引物 (
µM) |
1.50 |
|
15.00 |
| 反向引物 (
µM) |
1.50 |
|
15.00 |
| 模板 |
|
|
10.00 |
| KOD |
1.00 |
|
10.00 |
| ddH2O |
33.00 |
|
330.00 |
| |
|
|
500.00 |
推荐循环参数:
使用 1-2mM MgSO4 (1.5是标准 (曾是一个，但协议改变了), 2 可能工作更好地为基因组模板).
Novagen/Toyobo KOD非聚合酶
|
组成 |
体积 |
反应 |
最终 |
| 10X 缓冲区 |
5.00 |
|
50.00 |
|
mM dNTPs |
5.00 |
|
50.00 |
| 25mM MgCl2(
mM 最终) |
3.00 |
|
30.00 |
| 正向引物 (
µM) |
1.50 |
|
15.00 |
| 反向引物 (
µM) |
1.50 |
|
15.00 |
| 模板 |
|
|
10.00 |
| KOD (2.5 U/µl) |
0.4 |
|
10.00 |
| ddH2O |
33.00 |
|
330.00 |
| |
|
|
500.00 |
推荐循环参数:
使用 1-2mM MgCl2 (1.5是标准(曾是一个，但协议改变了), 2 可能工作更好地为基因组模板).
